Om die pigmente te kan onttrek Die chloroplaste word in 'n isolasiebuffer gesuspendeer. Om die pigmente uit die chloroplaste te kan onttrek, moet ons eers van die buffer ontslae raak. Wat is die beste manier om die chloroplaste van die buffer te skei? gebruik 'n sentrifuge om die te skei
Hoe isoleer jy 'n chloroplast?
In die chloroplast-isolasiemetode word die selwand meganies gebreek met 'n menger of homogeniseerder. Dan word die ononderbroke blaarweefsel en die sellulêre puin deur filtrasie verwyder. Die chloroplaste word deur sentrifugering met 'n percoll-gradiënt versamel.
Hoe maak jy 'n chloroplast-isolasiebuffer?
Berei die vereiste hoeveelheid 1X Chloroplast Isolasie buffer voor deur die 2X buffer voorraad 1:1 met dH2O water te verdun Voeg 10 µL van die 10% BSA oplossing per ml 1X Chloroplast by Isolasiebuffer. Voeg net voor gebruik 1 µL DTT per 1 ml chloroplast-isolasiebuffer by. Benoem hierdie buffer as 'Volledige buffer'.
Wat is in 'n chloroplast-isolasiebuffer?
DNA-isolasiebuffer het bestaan uit 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA en 1 mM DTT Die chloroplastlyse is verkry deur die inkubasie van die chloroplastkorrel met 8 ml DNA-isolasiebuffer, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkapto-etanol en 30 µl Proteinase K (10 mg/ml) in 'n sentrifugebuis by 55°C vir 4 uur.
Wat is die pH van die buffer wat gebruik word om spinasieblaar in chloroplast-isolasieprotokol te homogeniseer?
Spinasie is gelaai met goeie chloroplaste en hulle isoleer maklik. Jy sal die blare in 'n koue menger met 0,1 M fosfaatbuffer, pH 7,5 en 0,5 M sukrose moet sit om te keer dat hulle bars.
