Die volgende is 'n oorsig van die verskillende stappe van 'n indirekte immunofluoressensie-kleurprotokol
- Eksperimentbeplanning en monstervoorbereiding. …
- Voorbeeldfiksasie. …
- Selpermeabilisering. …
- Blokkeer. …
- Primêre teenliggaampie-inkubasie. …
- Sekondêre teenliggaam-inkubasie. …
- Teenkleur en montering.
Hoe voer jy immunofluoressensie uit?
Alle inkubasiestappe vind by kamertemperatuur plaas
- Was die selle twee keer en gebruik 'n pincet om die dekstrokie met omgekeerde selle versigtig in die bevochtigde kamer te plaas.
- Fixeer met 4 % formaldehied vir 10 minute en was 3 ×.
- Permeabiliseer met 0.1 % TX-100/PBS vir 15–20 minute en was 3 ×.
Hoe gebruik jy immunofluoressensie in 'n sel?
Immunofluoressensieprotokol vir aanhangende selle
- Saad 1–1,5 x104 selle per put van 'n 4-kamer skyfie in 500 mL kweekmedium. Inkubeer by 37°C by 5% CO2.
- 32–36 uur na sel-saai, verwyder die selkultuurmedium en spoel die selle 3 keer uit met 500 µL 1X PBS.
Wat is 'n voorbeeld van immunofluoressensie?
'n Navorser kan byvoorbeeld primêre teenliggaampies in 'n bok skep wat verskeie antigene herken, en dan kleurstofgekoppelde konynsekondêre teenliggaampies gebruik wat die bok-teenliggaampie konstante streek herken (" konyn anti-bok" teenliggaampies).
Wat is die gebruik van immunofluoressensiekleuring?
Immunofluoressensie (IF)-kleuring is 'n wyd gebruikte tegniek in biologiese navorsing en kliniese diagnostiek IF gebruik fluorescent-gemerkte teenliggaampies om spesifieke teikenantigene op te spoor. Gevolg deur beeldvorming, is dit 'n baie direkte tegniek aangesien jy eintlik iets kan sien.
