As jou proteïen nie dieselfde grootte as jou teenliggaam is nie, kan jy elueer met 0.1M glisien, pH2-3 en dan die proteïen van belang van die teenliggaam skei deur SEC te gebruik (soos superdex 200).
Wat maak 'n proteïen uit?
Die proteïene word geëlueer deur 'n gradiënt van toenemende hoeveelhede van 'n organiese oplosmiddel, soos asetonitril. Die proteïene elueer volgens hul hidrofobisiteit. Na suiwering deur HPLC is die proteïen in 'n oplossing wat slegs vlugtige verbindings bevat, en kan maklik gevriesdroog word.
Waarom het proteïene 'n lae pH-eluering?
Die gebruik van lae pH-buffer vir eluering van proteïen A is bekend om by te dra tot produk-aggregasie Tog, 'n meer beperkte stel bewyse dui daarop dat lae pH dalk nie die enigste is nie oorsaak van aggregasie in proteïen A-chromatografie, eerder kan ander fasette van die proses aansienlik bydra.
Hoe word eluering gedoen?
In analitiese en organiese chemie is eluering die proses om een materiaal uit 'n ander te onttrek deur met 'n oplosmiddel te was; soos in was van gelaaide ioon-uitruilharse om vasgevang ione te verwyder. … Nadat die oplosmiddelmolekules die analiet verplaas het, kan die analiet uit die kolom geneem word vir ontleding.
Hoeveel teenliggaampies het jy nodig vir Coip?
Vir roetine Co-IP-eksperimente is die teenliggaam wat ek gebruik het nie meer as 2ug (In my stel is 1.4 -2.0ug teenliggaampie voldoende om 2500-5000ug van vas te vang proteïenlisaat.) Maar dit is steeds afhanklik van die uitdrukkingsvlakke van jou teikenproteïene in jou monsters, so jy moet waarskynlik 'n paar wysigings doen.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
